الکتروفورز و انواع آن (Electrophoresis Methods)
صفحه اصلی »
الکتروفورز و انواع آن (Electrophoresis Methods)
مبانی و اصول الکتروفورز
- مفهوم حرکت مولکولها در میدان الکتریکی
- نقش بار، اندازه و شکل در مهاجرت
- انواع محیطهای الکتروفورز
- بافرهای الکتروفورز و نقش یونها
- مفهوم ولتاژ، جریان و مقاومت
تجهیزات، مواد مصرفی و آمادهسازی ژل
- معرفی تانکهای الکتروفورز
- انواع ترانس ایلومیناتورها (UV/Blue light)
- بافرهای TAE و TBE
- مواد سازنده ژل (آگارز، آکریلآمید)
- انتخاب غلظت مناسب ژل بر اساس نوع نمونه
- اصول ساخت ژل و آمادهسازی چاهکها
الکتروفورز ژل آگارز
- کاربردها (DNA, RNA Fragmentation)
- انتخاب غلظت مناسب آگارز
- نحوه رقیقسازی و ذوب ژل
- افزودن رنگ بارگذاری (Loading dye)
- انتخاب مارکر مناسب DNA/RNA ladder
- بارگذاری صحیح نمونهها
- تنظیم ولتاژ و مدت زمان اجرا
- مشاهده نتایج زیر UV/Blue light
- مشکلات رایج (اسمیر، باندهای محو، Migration غلط)
الکتروفورز SDS-PAGE
- اصول جداسازی پروتئینها بر اساس وزن مولکولی
- نقش SDS و بافر نمونه
- ساخت ژل متمرکز کننده (Stacking gel) و جدا کننده (Resolving gel)
- انتخاب درصد آکریلآمید مناسب
- آمادهسازی نمونه پروتئینی
- بارگذاری و اجرای الکتروفورز
- مشاهده ژل با رنگآمیزی Coomassie یا Silver staining
- تحلیل الگوهای باند پروتئینی
Native PAGE
- تفاوت SDS-PAGE و Native PAGE
- حفظ ساختار و فعالیت پروتئینها
- کاربردها (Enzyme activity, Protein complexes)
- نحوه آمادهسازی و اجرای ژل
الکتروفورز کاپیلری (Capillary Electrophoresis – CE)
- اصول CE و تفاوت آن با ژل الکتروفورز
- تجهیزات مورد نیاز
- کار در مقیاس میکروکانال
- کاربردها در DNA sequencing، آنالیز پروتئین، داروسازی
رنگآمیزی، مشاهده و تفسیر نتایج
- رنگآمیزی DNA/RNA (EtBr، SYBR Safe)
- رنگآمیزی پروتئین (Coomassie, Silver)
- انتخاب روش مناسب تصویربرداری
- تشخیص باندهای اختصاصی
- تحلیل شدت باندها (در صورت نیاز با ImageJ)
- بررسی تخریب، اسمیر یا آلودگی نمونه
عیبیابی (Troubleshooting)
- تشکیل باندهای ضعیف
- Migration ناهمگون
- شکستگی ژل
- عدم مشاهده باند
- مشکلات مرتبط با بافر یا ولتاژ
- ایرادات رایج بارگذاری نمونه
نکات ایمنی و بخش عملی
- نکات ایمنی کار با EtBr و آکریلآمید
- استفاده از UV Shield
- اجرای عملی یک ژل آگارز یا PAGE
- تحلیل نتایج به صورت عملی و رفع اشکال
