راه های زنده مانده کرونا ویروس

برای مبارزه و در امان مانده از کرونا ویروس می بایست اطلاعات علمی خود را در این حوزه بیشتر کنیم. شناسایی راه های زنده مانده کرونا ویروس و سایر ویروس ها نیز مهم است.

ویروس ها و نیازهایشان چیست؟

راه های زنده مانده کرونا ویروس نیازمند وجود شرایط خاصی است. ویروس ها برای زندگی پایدار نیاز به سلول دارند. ویروس ها یک انگل اجباری داخل سلولی هستند. ویروس ها برای تکثیر و ماندگاری از ارگانل های داخل سلولی استفاده می کنند. و در آزمایشگاه از محیط کشت استفاده می شود. برخی از ویروسهای جانوری را می‌توان منحصرا در بدن حیوانات زنده کشت داد. حیواناتی نظیر موش، خرگوش و خوکچه هندی.بطور کلی تلقیح حیوانات برای تشخیص ویرو سها در نمونه‌های بالینی مورد استفاده قرار می‌گیرد. به دنبال آلوده کردن حیوان بیماریزایی ویروس بررسی می شود.

نیاز ویروس ها به محیط های کشت

برای بررسی نوع عملکرد در میزبان، چگونگی سیکل زندگی، ویروس را در شرایط آزمایشگاهی کشت میدهیم. ویروس های تنفسی مانند آنفلوآنزا A، B، کروناویروس ها (عامل بیماری COVID-19) حساسیت بیشتری به شرایط خارج از میزبان دارند. برای همین باید شرایط حداقلی برای حفظ پایداری ویروس را فراهم کنیم. این شرایط در محیط کشت ویروس فراهم می شود. تا بتواند حداقل های مورد نیاز ویروس را فراهم کند. برای شناسایی مواد اثرگذار و راه های زنده مانده کرونا ویروس مطالب این مقاله مفید خواهد بود.

ملزومات مورد نیاز محیط ویروس

مواد مغذی از جمله ویتامینها، اسید آمینه، پروتئینها، مولکولهای بزرگ و کوچک برای سنتز و متابولیسم می باشد. علاوه بر این،  محیط بافری مناسب برای پایداری ویروس در خارج از محیط میزبان نیاز می باشد. حال اگر هر کدام از شرایط بالا به طور مناسب و به مقدار کافی در مدت زمان لازم فراهم نشود ویژگی های ساختاری و عملکردی ویروس تغییر و یا از بین می رود. بنابراین دیگر قابلیت استفاده در تست های تشخیصی و تحقیقاتی را ندارد.

محیط های انتقال نمونه های ویروسی

۱- اجزا محیط های انتقال نمونه های ویروسی: بافرها

از بافرهای نمکی برای ایجاد محیط با الکترولیت مناسب استفاده می کنیم. ابتدایی ترین آنها محلولهای نمکی متعادل شده مثل بافر فسفات است. در واقع این محلولها یونهای ضروری حیات را دارا هستند.

خصوصیات هر کدام از بافرها

RPMI: محیط کشت RPMI 1640 در کشت سلول­های پستانداران کاربرد دارد. برای کشت سلول­های هیبرید (hybrid cells) و کشت لنفوسیت­های انسانی تولید می­شود. PRMI 1640 در فرمت­های دارای گلوتامکس (GlutaMAX TM)، دارای L-glutamine، دارای معرف فنل رد (phenol red) و نیز فاقد فنل رد در بافر HEPES فرموله شده است.

محیط کشت DMEM با بالاترین کیفیت و پایداری و بهترین نتایج را در کشت سلول دارد. شامل فرمتهای high glucose، low glucose، دارای GlutaMAX TM و L-glutamine عرضه می­گردد.

محیط کشت DMEM/F12 با فرمول مغذی در کشت سلول کاربردهای متنوعی دارد. این محیط کشت در بافر HEPES فرموله می شود.

۲- اجزا محیط های انتقال نمونه های ویروسها: مواد غذایی

مخلوط پیچیده ای از پروتئینها، ویتامینها و عوامل رشد مانند سرم جنین گاوی و سرم اسب است. که با غلظت ۲ الی ۲۰ درصد استفاده می گردد. در تنظیم سیستم بافری نقش به سزایی دارد. FBS معروفترین آنها است. FBS غنی بوده و سرشار از عوامل رشد است. ضمنا ایمونوگلوبین کمتری نسبت به سایر سرم ها دارد.

وظایف سرم در محیط کشت و انتقال ویروس

سرم سلول ها را از آسیب فیزیکی محافظت می کند. سرم ها قدرت چسبندگی به سموم و خنثی سازی آنها را دارند. مهمترین نکته استفاده از سرم تهیه آن از شرکتهای معتبر برای جلوگیری از آلودگی است. عمده ترین آلودگی ها وجود مایکوپلاسما، ویروس گاوی مولد اسهال ویروسی و عامل آنسفالوپاتی اسفنجی شکل گاوی است. برای از بین بردن کمپلمان سرم  سرم را به مدت نیم ساعت در بن ماری ۵۶ درجه قرار میدهند. افزودن ۱۰ درصد سرم به محیط کشت باعث افزایش ۴.۸ mg/ml پروتئین به محیط کشت می شود. استخراج و فرآوری محصول اصلی و نهایی را مشکل میکند.

۳- اجزا محیط انتقال نمونه ویروس: آنتی بیوتیک ها

 ویژگی های یک محیط انتقال با کیفیت

• استفاده از یک محیط بافری با پایداری pH حداقل برای یک هفته
• استفاده از حداقل غلظت انتی بیوتیکی و ضد قارچی
• فاقد مهارکننده یا بازدارندگی برای آزمایش های مولکولی
• دارای خاصیت نشان دادن آلودگی با تغییر رنگ یا معیارهای شیمیایی

مشکلات و نواقص یک محیط انتقال کرونا ویروس

• در نگهداری بیش از سه روز رنگ آن تغییر می کند.
• حساس به آلودگی به دلیل نبود یا غلظت پائین آنتی بیوتیک های مناسب
• حساس به دمای فریزر که بعد از دفریز شدن خاصیت غنی بودن و پایداری خود را از دست می دهد
• دارای مواد مهارکننده آنزیم های واکنش PCR و مولکولی دیگر
• زرد شدن محیط کشت : در اثر آلودگی میکروبی
• ارغوانی شدن محیط کشت : در اثر نبود فاکتور نگهدارنده تنظیم کننده pH محیط

نویسنده: دکتر عباس احمدی وسمه جانی متخصص ویروس شناسی پزشکی