دوره کارآموزی کشت سلول در تحقیقات و سرطان

🎯 هدف از برگزاری دوره

🧪 آشنایی با اصول GLP، استریل‌سازی و کار در اتاق کشت
🧫 کار عملی با محیط‌های کشت، سرم‌ها، Supplements و آنتی‌بیوتیک‌ها
🔬 شمارش سلول و بررسی Viability
🧬 دفریز، پاساژ و فریز کردن سلول‌ها
🧪 انجام تست سمیت‌سنجی MTT
📊 تحلیل داده‌های MTT با نرم‌افزار GraphPad Prism
🧫 رنگ‌آمیزی AO/PI برای بررسی آپوپتوز و نکروز
🩸 استخراج سلول‌های PBMC از خون محیطی با فایکول
🧬 اجرای تست Colony Formation
⚙️ کنترل کیفی اتاق کشت و شناسایی آلودگی‌ها
🧫 آشنایی با اگزوزوم‌ها و سلول‌های بنیادی
💡 آشنایی با مسیرهای سیگنالینگ آپاپتوز و اهمیت آن‌ها در سرطان

 اصول GLP، استریلیزاسیون و تجهیزات اتاق کشت سلول

• استانداردهای GLP
• اصول استریل‌سازی
• کار صحیح با هود لامینار
• UV، اتوکلاو، انکوباتور CO₂
• قوانین ورود و خروج به اتاق کشت
• جلوگیری از Cross-Contamination

محیط‌های کشت، سرم‌ها و Supplements

• محیط‌های DMEM، RPMI، F12، MEM
• FBS، آنتی‌بیوتیک‌ها، L-Glutamine، Pen/Strep
• انتخاب محیط مناسب برای خطوط مختلف سلولی

 شمارش سلول و بررسی Viability

• نئوبار
• Trypan Blue
• تشخیص سلول‌های زنده و مرده
• تعیین تعداد سلول برای پاساژ یا تست‌ها

 دفریز، پاساژ و فریز کردن سلول‌ها

• Thawing صحیح از نیتروژن مایع
• پاساژ خطوط چسبنده و شناور
• تهیه Freezing Media
• نگهداری سلول‌ها در تانک نیتروژن

 سمیت‌سنجی MTT

• طراحی آزمایش
• Seed کردن صحیح
• تهیه MTT Solution
• انکوباسیون و انحلال کریستال‌ها
• خوانش OD

 تحلیل داده‌های MTT با GraphPad Prism

 

• IC50
• Plot Curve
• Normalization
• Statistical Analysis
• رسم نمودارهای اختصاصی

 رنگ‌آمیزی AO/PI

• تهیه مخلوط رنگ
• رنگ‌آمیزی سلول‌ها
• خوانش با فلورسنت میکروسکوپ
• تشخیص سلول‌های زنده، آپوپتوتیک و نکروتیک

 استخراج PBMC با فایکول

• لایه‌گذاری صحیح خون و فایکول
• سانتریفیوژ
• جداسازی لایه بوفی‌کوت
• شستشو و آماده‌سازی برای کشت

 تست Colony Formation (کلونوژنیک)

• Seed کردن تعداد کم سلول
• انکوباسیون طولانی‌مدت
• فیکساسیون و رنگ‌آمیزی
• شمارش کلونی‌ها
• تحلیل بقای سلولی

 کنترل کیفی اتاق کشت و آلودگی‌ها

• شناسایی آلودگی قارچی
• تشخیص آلودگی باکتریایی
• آلودگی Mycoplasma
• چک‌لیست‌های روزانه QC

آشنایی با اگزوزوم‌ها

• نقش در سرطان
• روش‌های استخراج
• کاربرد در تحقیقات سلولی

سلول‌های بنیادی

• Stem Cell های بالغ و جنینی
• کاربردهای تحقیقاتی
• تفاوت مسیرهای تمایزی

 مسیرهای سیگنالینگ آپاپتوز و اهمیت آن‌ها در سرطان

• مسیر Intrinsic و Extrinsic
• نقش Caspaseها
• ارتباط با تمایز، رشد توموری و مرگ سلولی
• درک مکانیزم‌های داروهای ضد سرطان